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    幽門黃曲霉抑菌測試——復達客戶檢測案例

    2022年01月13日,客服中心接到安徽某公司關于菁海抑菌菜板原料的檢測,接到反饋后,實驗室工程師第一時間與客戶進行詳細溝通,情況如下:


    客戶背景


    客戶是一家新材料研發公司,想要對自己家的四款菁海抑菌菜板原料的黃曲霉(B1.B2.G1.G2) 幽門螺旋桿菌 (抑菌防霉)進行檢測,通過網絡平臺找到我們,咨詢具體項目并出具專業的第三方檢測報告。


    樣品名稱


    菁海抑菌菜板原料 1  菁海抑菌菜板原料 2  菁海抑菌菜板原料 3  菁海抑菌菜板原料 4


    客戶需求


    根據客戶提供的樣品,確定樣品具體測試的條件時間和項目,然后提供相關的樣品進行測試,出具專業的第三方檢測報告。


    解決方案


    溝通客戶寄送樣品,實驗室接收到樣品及說明書后開始進行最終的確認測試。客戶提供的測試要求相對而言比較嚴格,收到樣品后我們立刻溝實驗室進行測試的協調,實驗中我們使用了不同菌種、不不同模擬環境進行測試。從而順利進行測試。


    測試項目:根據樣品說明書確定了測試項目:有黃曲霉(B1.B2.G1.G2) 幽門螺旋桿菌抑菌防霉效果,部分測試結果如下:


    測試結果


    一、菌株:


    黃曲霉 AS 3.3950


    二、黃曲霉孢子菌懸液的制備:


    1.取菌種斜面,加入3~5mL無菌純水,用無菌接種環在試驗菌種的表面輕刮。


    2.將孢子提取液注入250mL的錐形瓶,瓶內裝45mL 無菌純水和50粒~70粒直徑為5mm的實心玻璃球。


    3.劇烈振蕩錐形瓶,以打碎孢子塊并使孢子從菌絲體中釋放出來。


    4.用裝有6m厚玻璃棉的玻璃斗,將霉菌孢子懸浮液過濾到錐形瓶中,以去除大的菌絲體碎片和瓊脂塊。


    5.將過濾后的孢子懸浮液離心,棄掉上層液。


    6.在剩余物中加入50mL生理鹽水重新懸浮并離心。將獲得的每種霉菌孢子以這種方法離心3次(直到上層液變清)。


    7.選適宜稀釋度分別取1ml接種瓊脂平皿,計算菌液濃度。


    三、試驗程序


    試驗方法:《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗。


    試驗過程:


    1.試驗樣品和陰性對照樣品組(HDPE 高密度聚乙烯樹脂)經121℃滅菌15min。


    2.將 0.75g樣品放入 250ml 的錐形瓶中,分別加入 70ml PBS 和 5ml 菌懸液,使菌懸液在PBS中的濃度為 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。


    3.將錐形瓶固定于振蕩搖床上,在作用溫度為 20℃~25℃的條件下,以 300r/min振搖 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中,10倍稀釋至適宜濃度,分別吸取1ml,置于兩個平皿,用涼至40~45℃的孟加拉紅(虎紅)瓊脂培養基作傾注,轉動平皿,使其充分均勻,瓊脂凝固后翻轉平板,置25℃±2℃培養3~5d,做活菌計數,作為振蕩前菌落數。


    4.將 0.75g 樣品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌懸液的錐形瓶中,然后將錐形瓶固定于振蕩搖床上,在作用溫度為 20℃~25℃的條件下,以 300r/min 振搖1h。用PBS作適當稀釋。分別吸取振蕩前和振蕩后樣液各 1.0ml,以瓊脂傾注法接種平皿,每個樣液接種兩個平皿,進行活菌培養計數,作為振蕩后菌落數。


    5.試驗同時設陰性對照樣品組(HDPE 高密度聚乙烯樹脂)和不加樣品組(空白組)。操作程序均與試驗組相同。不加樣品組分別取 5ml 菌懸液和70ml PBS 加入 250ml 錐形瓶中,混勻,分別于振蕩前和振蕩后1h,各取適當稀釋度進行活菌培養計數。


    6.試驗重復3次,按下列公式計算抑菌率:


    1.png


    式中:X為抑菌率,%;為樣本振蕩前平均菌落數,cfu/ml;為樣本振蕩后平均菌落數,cfu/ml。


    結果


    幽門黃曲霉抑菌測試.png

    幽門黃曲霉抑菌測試.png


    結論


    在本次試驗條件下,按照《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗判定:


    1.本實驗中不加樣品組的菌落數在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之間,且樣品振蕩前后平均菌落數差值在10%以內,試驗有效。


    2.試驗組抑菌率與對照樣品組抑菌率的差值<26%,產品無抗菌作用。


    一、菌株:幽門螺旋桿菌 BNCC 354364


    二、試驗程序


    試驗方法:《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗。


    試驗過程:


    1.試驗樣品和陰性對照樣品組(HDPE 高密度聚乙烯樹脂)經121℃滅菌15min。


    2.將 0.75g樣品放入 250ml 的錐形瓶中,分別加入 70ml PBS 和 5ml 菌懸液,使菌懸液在PBS中的濃度為 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。


    3.將錐形瓶固定于振蕩搖床上,在作用溫度為 20℃~25℃的條件下,以 300r/min振搖 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中,10倍稀釋至適宜濃度,分別吸取1ml,置于兩個平皿,用涼至40~45℃的哥倫比亞血瓊脂培養基作傾注,轉動平皿,使其充分均勻,瓊脂凝固后翻轉平板,置35℃±2℃ 5%CO2培養3~5d,做活菌計數,作為振蕩前菌落數。


    4.將 0.75g 樣品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌懸液的錐形瓶中,然后將錐形瓶固定于振蕩搖床上,在作用溫度為 20℃~25℃的條件下,以 300r/min 振搖1h。用PBS作適當稀釋。分別吸取振蕩前和振蕩后樣液各 1.0ml,以瓊脂傾注法接種平皿,每個樣液接種兩個平皿,進行活菌培養計數,作為振蕩后菌落數。


    5.試驗同時設陰性對照樣品組(HDPE 高密度聚乙烯樹脂)和不加樣品組(空白組)。操作程序均與試驗組相同。不加樣品組分別取 5ml 菌懸液和70ml PBS 加入 250ml 錐形瓶中,混勻,分別于振蕩前和振蕩后1h,各取適當稀釋度進行活菌培養計數。


    6.試驗重復3次,按下列公式計算抑菌率:


    1.png


    式中:X為抑菌率,%;為樣本振蕩前平均菌落數,cfu/ml;為樣本振蕩后平均菌落數,cfu/ml。


    結果


    幽門黃曲霉抑菌測試.png

    幽門黃曲霉抑菌測試.png

    幽門黃曲霉抑菌測試.png


    結論


    在本次試驗條件下,按照《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗判定:


    1.本實驗中不加樣品組的菌落數在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之間,且樣品振蕩前后平均菌落數差值在10%以內,試驗有效。


    2.試驗組抑菌率與對照樣品組抑菌率的差值<26%,產品無抗菌作用。


    客戶反饋


    客戶收到報告后說會根據結果針對自己的產品進行改良,感謝我們在產品研發過程中給出的建設性建議,并表示產品改良后會繼續找我們合作,并為我們的服務提出的大大的好評。


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