客服中心反饋紹興某生物技術有限公司想了解自己生產的保健食品液體飲料，需要檢測肽含量。

客戶背景

客戶想把他們自主研發生產的脾氨肽濃縮液(生產日期2023年11月20日)和肝蛋白水解物濃縮液(生產日期2023年11月22日)根據《GB/T22729 海洋魚低聚肽粉》進行低聚肽含量(以干基計)/%檢測，看是否符滿足研發目的。

樣品名稱

脾氨肽濃縮液(生產日期2023年11月20日)

肝蛋白水解物濃縮液(生產日期2023年11月22日)

客戶需求

檢測樣品低聚肽含量(以干基計)/%

解決方案

根據GB/T 22729 海洋魚低聚肽粉 低聚肽含量

方法和原理：

低分子質量的蛋白質水解物(包括低聚肽及游離氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子質量的蛋白質在三氯乙酸溶液中易沉淀。樣品經三氯乙酸溶液溶解后,離心分離出沉淀蛋白質,收集離心清液。按照GB/T 5009.5規定的方法測定離心清液的酸溶蛋白質水解物含量,清液的酸溶蛋白質水解物含量減去游離氨基酸含量得到低聚肽的含量。

酸溶蛋白質水解物含量的測定：稱取2g(精確至0.001 g)樣品,加入10 mL 15%三氯乙酸溶液,混合均勻,靜置10 min。將樣品溶液在4 000 r/min下離心10 min后,取全部離心清液,按GB/T 5009.5規定的方法測定清液的蛋白質水解物含量,計算出樣品中酸溶蛋白質水解物含量。蛋白質換算系數為6.25.檢驗結果根據樣品的干燥失重,折算為干基。

游離氨基酸含量的測定(高效液相色譜儀測定法)：用三氯乙酸沉淀蛋白質后，以鄰苯二甲醛(OPA)和氯甲酸芬甲酯(FMOC一CI)分別作為一級氨基酸和二級氨基酸的衍生反應試劑,采用柱前自動衍生化反相高效液相色譜法測定海洋魚低聚肽粉中的游離氨基酸總量。

稱取樣品0.5 g,精確至0.000 1 g,于25 mL容量瓶中,加5%三氯乙酸10 mL沉淀2 h,定容搖勻，過濾,于10 000 r/min離心15 min,取上清液上機,采用外標法進行測定。色譜條件:分析柱:Hypersil AA-ODS,5 um,200 mm×2.1 mm(內徑)。流動相:A液:含0.018%三乙胺(TEA)的20 mmol/L乙酸鈉緩沖液,用稀乙酸調至pH7.2.加0.3%四氫味喃(THF);B液:20%的 100 mmol/L乙酸鈉緩沖液,用稀乙酸調至pH7.2.加40%乙腈和40%甲醇。梯度洗脫程序:0 min時A液為100%,在17 min內B液由o%至60%;18 min時B液為100%,并保持至24 min;25 min時B液回到0%。流速:18.1 min前為0.45 mL/min; 18.5 min升至0.8 mL/min,并保持至23.9 min;24 min降回至0.45 mL/min。紫外檢測:測定一級氨基酸用338 nm,二級氨基酸用262 nm(15 min后)。

實驗結果：經檢測，客戶送的脾氨肽濃縮液和肝蛋白水解物濃縮液的低聚肽含量分別為28.1%和20.9%。

客戶反饋

客戶對于測試結果和我們技術人員進行探討、我們相互研究并且給客戶提供寶貴的意見。并且后續還有好幾批樣品要送來進行檢測。